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　　非洲豬瘟病毒提取檢測試劑盒(AB盒)???????? ???? ?? ? ?? ??(AB box)FT-ZWSJ1非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的一種高度接觸傳染性聽得進、廣泛出血性豬病毒病，死亡率可高達(dá) 100%技術的開發，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大沖擊發揮重要帶動作用。雖然不感染人問題、無公共衛(wèi)生危害有效性，卻是一種毀滅性動物傳染病傳遞，是養(yǎng)豬業(yè)的殺手用的舒心，具有重大的政治、經(jīng)濟(jì)和社會影響強化意識。

　　非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒使用說明書

　　(快提核酸擴(kuò)增試劑盒)

　　【產(chǎn)品名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒(PCR熒光探針法)

　　英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus (PCR Fluorescence  Probing)

　　[預(yù)期用途]

　　本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒(ASFV, African Swine Fever

　　Virus)核酸長期間，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查現場。

　　【試劑盒組分】

　　1高端化、試劑盒組成及貯藏條件

試劑盒組成及貯藏條件

　　2、需自備材料：生理鹽水應用的因素之一、無菌槍頭解決、熒光PCR專用反應(yīng)管、記號筆等敢於監督。

　　【操作步驟】

　　一幅度、樣品制備

　　1、 血液樣品：采集抗凝血(抗凝劑為EDTA)或血清樣品重要的作用，編號備用貢獻。

　　2、  組織樣品：采集脾臟穩中求進、肝臟統籌、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g(黃豆粒大小)適應性，眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨堅實基礎，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000  rpm/分鐘離心2分鐘重要作用，取上清液于滅菌離心管中等地，編號備用。

　　二尤為突出、DNA提取

　　取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管規定，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫(20°C左右)靜置3分鐘空間載體，加入反應(yīng)液B  20μL,吹打混勻即可高質量，若為抗凝全血相對簡便，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

　　二流程、PCR擴(kuò)增

　　1合作、配液：取出PCR反應(yīng)液、酶混合液助力各業，在室溫*融化后極致用戶體驗，充分混勻，瞬離應用，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中建議，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用;或按照每份PCR反應(yīng)液17μL,  酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量相貫通，混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應(yīng)管中不斷發展，剩余試劑立即凍存;(操作過程要注意避光)

　　2、加樣擴(kuò)增：分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照宣講活動，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個循壞的55°C時收集熒光信號不斷進步。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和  quencher 為 none 的模式。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時間短無法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C： 5秒  55°C：30秒確定性。)

　　【結(jié)果判定】

　　1更加廣闊、 基線和閾值設(shè)定;基線調(diào)整取6-15個循環(huán)的熒光信號損耗，閾值設(shè)定以閾值線剛好超過陰性對照檢測 熒光曲線的最高點(diǎn)為原則講故事。

　　2、 質(zhì)量控制：反應(yīng)結(jié)束后性能穩定，陰性對照的檢測結(jié)果應(yīng)無特定的擴(kuò)增曲線全面革新，Ct值為>38或無;陽性對照  的Ct值應(yīng)≤30.0,且明顯的擴(kuò)增曲線;否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

　　3情況正常、 樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數(shù)型增加行業分類，且結(jié)果顯示Ct值<35.0,報告為陽性;未檢測到Ct  值或Ct值>38或無明顯擴(kuò)增曲線，則樣品判定為陰性提高鍛煉。35≤Ct值≤8時發展邏輯，復(fù)檢一次，重復(fù)結(jié)果為陽性者判定為陽性有所提升，否則判定為陰性聽得進。

　　【注意事項(xiàng)】

　　1、實(shí)驗(yàn)前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書先進水平，嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行便利性，在操作過程中對時間、試劑體積等精 確控制可以獲得結(jié)果重要平臺。

　　2深刻認識、 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理核心技術。各區(qū)間人員、器材主動性、試劑及空氣流向應(yīng)有產(chǎn)格要求創造性。

　　3、 有關(guān)耗材確保潔凈道路、無菌保障性，核酸提取完成后盡快進(jìn)入下一步試驗(yàn)或冷凍保存。

　　4責任製、預(yù)混后的試劑應(yīng)盡量在短期內(nèi)使用完畢十分落實，戶外使用應(yīng)在加冰袋的泡沫盒保存，每日試驗(yàn)完畢應(yīng)及時 冷凍保存有序推進。

　　5設施、 對于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套堅定不移。

　　6組合運用、 凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下*融化，充分混勻迎難而上，瞬時離心使液體*沉于管底積極。

　　7、 樣品堅持先行、陰性對照封蓋后產業，在通風(fēng)環(huán)境添加陽性對照并及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等假陽性污染情況較常見。

　　8可持續、 擴(kuò)增反應(yīng)完畢后的PCR管嚴(yán)禁開蓋,應(yīng)和試驗(yàn)產(chǎn)生的其它廢棄物一起及時收集,遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行無害化處理。

　　【規(guī)格】50頭份/盒體製。

　　【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存構建，有效期12個月。