负氧离子监测站_自动气象站_水质在线分析仪-山东风途物联网科技有限公司

　　【獸藥名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟檢測試劑盒

　　漢語拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

　　英文名稱：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit 商品名稱：無

　　非洲豬瘟檢測試劑盒【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

　　【用法與判定】

　　1 用法

　　1.1待檢樣品釆集、保存及運輸

　　1.1.1樣品釆集

　　(1) 活豬樣品 無菌采集抗凝血或血清5mL

　　(2) 病死豬剖檢樣品或屠宰場剖檢樣品 無菌采集死豬的牌、肺發揮重要作用、腎醒悟、扁桃體、淋巴結高質量、肌 肉等組織樣品也逐步提升。2?8°C低溫運至實驗室用于檢測。

　　(3) 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關場所的糞便註入了新的力量、飼料不可缺少、污水樣品。2?8C低溫運至 實驗室用于檢測技術特點。

　　1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應不超過24小時提高鍛煉，-70°C條件下保存，避免反復凍 融凝聚力量。

　　1.1.3樣品運輸泡沫箱加冰袋后密封進行運輸有所提升。包裝和運輸應符合農業(yè)農村《高致病性動 物病原微生物菌(毒)種或者樣品運輸包裝規(guī)范》和交通運輸門關于危險品運輸管理的有關規(guī)定。

　　1.2樣品處理

　　1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中新的力量，8000 r/min離心2分鐘取上層血漿先進水平，編號待 檢。非抗凝血樣品置于離心管中全面展示，待凝固后重要平臺，8000 r/min離心2分鐘取200μL上層血清，編號待檢核心技術。

　　1.2.2組織樣品處理取適量脾臟應用提升、肝臟、淋巴結創造性、扁桃體發展的關鍵、肌肉等組織，置于研磨器或研磨 管中研磨規模設備，再加適量生理鹽水混勻真諦所在，制成約10%的組織勻漿，8000 r/miii離心2分鐘競爭力，取200μL上 清于RNase/DNase-free無菌離心管中充分，編號備用。

　　1.2.3環(huán)境樣品處理

　　1.2.3.1糞便集聚、飼料樣品處理方法取適量的糞便競爭力、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨 混勻，制成約10%的勻漿液.8000 r/min離心2分鐘發展基礎，取200μL上清于RNase^DNase-free無菌離心 管中兩個角度入手，編號備用建強保護。

　　1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進行核酸提取同期。

　　1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進行DNA核酸提取生產效率。

　　1.4熒光PCR反應：

　　1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應液、酶混合液效果，室溫融化后使用，2000 r/min離心5秒。設被 檢樣品可持續、陽性對照和陰性對照總和為n,則反應體系配制如下：

　　試劑 體系

　　PCR 反應液 17× (n+1) μL

　　酶混合液 3× (n+1) μL

　　1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑主要抓手，充分混勻后瞬時離心。按照20μL/ 管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應管構建。

　　1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應管中分別加入陰性對照創新科技、陽性對照各5μL、處理好的待測 核酸各5μL,終體積25μL/管共創輝煌，蓋好熒光PCR反應管蓋具有重要意義，混勻后瞬時離心，轉移到熒光PCR儀器 上大部分。

　　144將PCR反應管放置在熒光PCR儀樣品槽中強大的功能，在熒光PCR儀上運行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在PCR擴增階段每個循環(huán)的55C時采集熒光信號。設置擴增體系為25卩I, 同時要選擇passive reference和quencher為none的模式解決方案。(注：若熒光PCR儀(如AB17500)按說明 書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行優勢，可將預擴增和PCR擴增條件變更為95C： 5秒 55°C： 30 秒)

　　2結果判定

　　2.1試驗有效性判定

　　陽性對照有典型擴增曲線且Ct值W30.且陰性對照無Cl值或無擴增曲線，線形為直線或輕微 斜線增產，無指數(shù)增便利性。則判試驗結果有效。否則行動力，此次試驗視為無效規模最大。

　　2.2樣品判定

　　2.2.1陽性：樣本檢測結果Ct值W35且有明顯指數(shù)增，判定檢出非洲豬瘟病毒核酸統籌。

　　2.2.2可疑：樣本檢測結果Ct值在35?38范圍內最深厚的底氣。此時應對樣本進行重復檢測，如果重復實驗 結果Ct值仍在35?38范圍內振奮起來，有明顯指數(shù)增.則判定為陽性品質，否則為陰性。

　　2.2.3陰性：樣本檢測結果Ct值>38或無Cl值深入各系統，判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸解決問題。

　　【注意事項】(1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按照操作步驟執(zhí)行作用，在操作過 程中對時間相互配合、試劑體積等準確控制可以獲得好的結果。

　　(2) 實驗室應嚴格按照有關規(guī)定分區(qū)管理，依照配液區(qū)-模板提取區(qū)-擴增區(qū)-分析區(qū)順序 進行基因檢測智能化。各區(qū)間人員了解情況、器材、試劑及空氣流向應有嚴格要求技術研究。

　　(3) 核酸提取有關耗村確保潔凈重要的、無DNase/RNase,提取過程盡量低溫、快速姿勢，完成后進入 下一步實驗或凍保相互融合。

　　(4) 對于頂采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋，對于底采光儀

　　器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底綠色化，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套不同需求。

　　(5) 凍存試劑使用前應于室溫下*融化，瞬時離心使液體*沉于管底保持穩定。避免反復凍融創造更多， 以免影響試劑性能。

　　(6) 樣品不斷進步、陽性對照等在使用后及時封蓋工藝技術，.避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性。

　　(7) 擴增產物禁止開蓋規模，實驗產生的廢棄物應及時收集近年來，遠離PCR實驗室進行無害化處理。 【規(guī)格】50頭份/盒

　　【貯藏與有效期】試劑盒置-20°C以下避光保存發展目標奮鬥，有效期12個月技術先進。

　　【批準文號】獸藥生字163668871